Propósito de la tinción
A menudo describimos cómo encontrar algo según su color. Por ejemplo, podemos decir «por favor, tráeme el libro rojo» o «necesito la espátula amarilla». En química, los colores también son una forma fácil de identificar diferentes compuestos. Al tener un tinte que tiñe selectivamente solo ciertas sustancias, podemos identificar y determinar la magnitud de los compuestos de interés.
Algunos tintes comunes son el rojo alizarina, el azul alcián y el amarillo alizarina. Cada uno de estos tintes teñirá selectivamente compuestos específicos. Por ejemplo, el rojo de alizarina teñirá los carbonatos y el azul alcián teñirá los mucopolisacáridos. Entonces, si desea saber cuánto carbonato de calcio hay en una muestra (como en los huesos), puede usar rojo de alizarina y el tinte manchará el carbonato de calcio, pero eliminará todo lo demás. Se puede medir la cantidad de tinción roja y así determinar la cantidad de carbonato de calcio en la muestra de hueso.
Protocolos de tinción
En general, hay cuatro pasos para cualquier protocolo de tinción:
- Vierta el tinte
- Establecer tinte
- Enjuague el exceso de tinte
- Observar y medir la cantidad teñida
Cada tipo de tinte difiere en estos protocolos según lo que se requiere para fijar el tinte y lo que se puede usar para enjuagar el tinte. A veces, el tinte o la muestra también deben prepararse antes de poder verterlos, y se pueden usar diferentes métodos para cambiar la intensidad del color.
Normalmente, las moléculas o células individuales que se tiñen se observan con un microscopio, aunque algunos métodos utilizan fluorescentes para ver los colores. La mayoría de los métodos de tinción utilizan ácidos, por lo que se deben usar guantes, gafas protectoras y una bata de laboratorio para protegerse de las quemaduras por ácido. Cuando se utiliza ácido concentrado, se debe utilizar una ventilación adecuada para evitar irritación y daño respiratorio.
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Ahora veamos los pasos específicos utilizados para los tintes rojo de alizarina, azul alcián y amarillo de alizarina.
Protocolos de rojo de alizarina
El tinte rojo de alizarina se mezcla primero con un ácido, como el ácido clorhídrico. La cantidad de ácido clorhídrico afectará la intensidad del color rojo. La reacción entre la mezcla de tinte y los carbonatos formará burbujas de CO 2 , por lo que deben explotarse para garantizar que el tinte pueda llegar a todas las áreas de la muestra.
Para eliminar el exceso de tinte, la muestra debe enjuagarse con un chorro suave de agua desionizada. No se necesita mucho para enjuagar el exceso de tinte, por lo que debe hacerlo con cuidado. Luego, la muestra se seca rápidamente y se puede medir la cantidad de rojo.
Protocolos Azul Alcian
El azul alcián también usa un ácido, típicamente ácido acético, pero generalmente se coloca en la muestra por separado. Primero se vierte el ácido sobre el portaobjetos para acidificar la muestra, luego se vierte el tinte azul alcián sobre la muestra. Luego, debe calentarse para fijar el tinte, lo que se puede hacer con un mechero Bunsen o un microondas.
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Luego se puede usar agua para enjuagar el exceso de tinte. Este tinte no es tan sensible como el rojo de alizarina, por lo que puede usar un chorro constante de agua. Luego se seca y se mide la cantidad de color azul.
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Protocolos de amarillo de alizarina
El amarillo alizarina es único porque tiene un color amarillo en condiciones ácidas, mientras que tiene un color rojo en condiciones alcalinas. Por lo tanto, generalmente se usa para teñir papel para una prueba de pH rápida. Todo el papel se tiñe con amarillo alizarina, utilizando un método similar al azul alciano y al rojo alizarina, excepto sin ácido.
A continuación, el papel se inserta en una muestra líquida. La muestra líquida luego reacciona con el amarillo de alizarina. Si la muestra tiene un pH inferior a 10,1, el papel de pH aparecerá de color amarillo. Un pH superior a 12,0 dará un color rojo distintivo. El rango entre 10.1-12.0 será de color amarillo-rojo.
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Resumen de la lección
En química, los tintes se pueden utilizar para identificar y medir compuestos. El rojo de alizarina se usa para medir los carbonatos, y la cantidad de ácido clorhídrico usado cambiará la intensidad del rojo. El azul alcián se usa para medir los mucopolisacáridos y el tinte se fija con calor. El amarillo de alizarina se usa para probar los cambios de pH porque a un pH por debajo de 10.1 tiene un color amarillo, mientras que por encima de 12.0 es un color rojo. En general, la tinción se realiza con cuatro pasos:
- Vierta el tinte
- Establecer tinte
- Enjuague el exceso de tinte
- Observar y medir la cantidad teñida
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