¿Cuáles son algunas variaciones de un PCR?
Los científicos utilizan una amplia gama de técnicas moleculares para identificar genes importantes. Algunas técnicas tienen varias variaciones que se utilizan según lo que el científico esté tratando de lograr. Un ejemplo es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , una técnica molecular utilizada para amplificar un gen específico de una muestra de ADN determinada. Sin embargo, como se mencionó anteriormente, esta técnica tiene varias variaciones, como PCR en tiempo real, PCR anidada y PCR multiplex. Esta lección describirá estas tres variaciones y explicará cómo podría utilizarlas un científico.
¿Qué es la PCR en tiempo real?
La primera variación que cubriremos es la PCR en tiempo real. A diferencia de la PCR estándar, en la que los científicos tienen que esperar hasta el final de la reacción para obtener resultados, durante la PCR en tiempo real los científicos pueden visualizar la amplificación de su gen de interés en tiempo real. Sigue el mismo protocolo básico de una PCR estándar, como los tiempos de desnaturalización, recocido y alargamiento. Sin embargo, la mezcla de polimerasa utilizada para esta variación de la PCR hace que el producto tenga fluorescencia, lo que permite a los científicos cuantificar los datos. Entonces, ahora que conocemos el concepto básico de una PCR en tiempo real, cubriremos cómo un científico puede usar esta técnica. Un científico que estudia los efectos de un determinado fármaco en un gen específico aísla el ADN de la muestra tratada. El científico utilizará la PCR en tiempo real para comparar la expresión genética específica del grupo tratado con el fármaco con la del grupo no tratado. Un científico también puede seguir la expresión genética durante las diferentes etapas de desarrollo de un organismo específico. Un ejemplo sería un científico que estudia la expresión de un gen involucrado en el desarrollo del corazón. Mediante el uso de modelos animales, el investigador puede seguir la expresión de un gen específico involucrado en el desarrollo del corazón desde la etapa de 1 célula hasta una etapa más desarrollada.
¿Qué es una PCR anidada?
Hay ocasiones en las que el gen de interés no está muy expresado en el ADN extraído previamente. Los científicos pueden utilizar la PCR anidada para amplificar genes de baja expresión. Esta variación de la PCR es un proceso de dos pasos. El primer paso implica amplificar un gran segmento del gen de interés. El segundo paso consiste en realizar una segunda PCR en el producto de la primera reacción. Un científico diseñará cebadores para amplificar un segmento del gen a partir de las bases previamente amplificadas.
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Esta variación requiere que un científico tenga más conocimiento del gen de interés. Debe conocerse un porcentaje mayor de la secuencia de ADN del gen de interés para poder amplificar diferentes regiones del gen. Si un científico quiere amplificar el gen completo, se debe conocer la localización en el cromosoma para amplificar regiones de genes vecinos que flanquean el gen de interés. Aunque tiene sus limitaciones, esta variación permite a los científicos estudiar genes que no están altamente expresados durante ciertas etapas de desarrollo o con diferentes tratamientos farmacológicos.
¿Qué es una PCR multiplex?
La tercera variación que cubriremos es una PCR multiplex. Una PCR multiplex es una variación que permite la amplificación de varios genes durante una sola reacción. Aunque esta variación sigue el protocolo de PCR estándar con respecto a las etapas de desnaturalización, hibridación y alargamiento, la optimización para esta PCR es más extensa. Como el propósito de esta PCR es amplificar varios genes durante una sola reacción, se requieren diferentes conjuntos de cebadores. Un científico necesita diseñar los cebadores para que tengan la misma temperatura de recocido para que la reacción funcione correctamente. Después de la reacción, un científico puede analizar los resultados mediante electroforesis en gel, de manera similar a una PCR estándar.
¿Qué es el Monitoreo en Tiempo Real de Bioprocesos?
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Un científico que estudie el desarrollo del ojo puede amplificar la expresión de genes implicados en el desarrollo del ojo en una sola reacción. Al amplificar estos genes del ADN extraído durante diferentes etapas tempranas del desarrollo, un científico puede saber cuándo ciertos genes están activados y desactivados. Esta técnica también puede prevenir cualquier variación que pueda ocurrir al probar diferentes muestras y también puede hacer que el estudio general sea más rentable.
Resumen de la lección
Esta lección cubrió los conceptos básicos de las diferentes variaciones de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , una técnica utilizada para amplificar genes de una muestra de ADN. Una PCR en tiempo real es una variación que se utiliza para amplificar y cuantificar el ADN, al tiempo que permite a un científico ver los resultados en tiempo real. Una PCR anidada se usa cuando un científico quiere amplificar un gen que no está altamente expresado en una muestra de ADN. Y la tercera variación cubierta fue la PCR multiplex . Esta variación permite a los científicos amplificar diferentes genes en una sola reacción. La PCR es una técnica importante utilizada por los científicos. Al desarrollar diferentes variaciones, los científicos pueden hacer ciencia de manera más eficiente durante su viaje continuo hacia la comprensión del cuerpo humano.
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