La prueba de Biuret
La próxima vez que mire la parte posterior de un paquete de alimentos, tome nota del panel de información nutricional. Verá las cosas habituales: grasa total, carbohidratos, sodio, etc., todo con sus porcentajes diarios. Sin embargo, al final de la lista está la proteína. Quizás se esté preguntando: ¿cómo determinaron cuánta proteína hay en este alimento que está viendo? Uno de los métodos es mediante la prueba de biuret.
La prueba de biuret mide los enlaces peptídicos en una muestra. Recuerde que las proteínas están formadas por aminoácidos conectados entre sí por enlaces peptídicos. Entonces, la prueba de biuret no puede probar aminoácidos individuales, porque no están conectados con un enlace peptídico.
En una solución alcalina, el cobre II puede formar un complejo con los enlaces peptídicos. Una vez que se ha formado este complejo, la solución pasa de un color azul a un color púrpura. Cuanto más profundo es el color púrpura, más complejos péptido-cobre se han formado.
Método
Primero, se necesita hacer un estándar. Por lo general, esto se hace usando agua desionizada para una prueba de proteína negativa y claras de huevo de albúmina para una prueba de proteína positiva completa. Una vez que sepamos cómo se ve el color azul en una prueba negativa y el color púrpura en una prueba positiva, podemos comenzar a probar las incógnitas. Las diversas pruebas se enumeran aquí para que las vea:
- Agregue hidróxido de sodio a la muestra; esto hace que la muestra sea alcalina
- Agregue solución de sulfato de cobre (II) a la muestra
- Ver cambio de color
- Mida el color con un espectrofotómetro
La última prueba es para que podamos medir exactamente cuánta proteína está presente. No podemos decir exactamente qué tono de púrpura o azul está presente, por lo que usamos una máquina llamada espectrofotómetro que puede indicarnos el tono exacto.
¿Qué es la prueba textil? – Métodos e Importancia
Ley y ecuación de Beer
Según la ley de Beer , la lectura de absorción del espectrofotómetro es directamente proporcional a la cantidad de proteína en la muestra. Para calcular la ecuación de la ley de Beer, primero necesitamos ejecutar varias muestras conocidas. Esto nos da una línea en la que basar nuestras muestras.
Digamos que inventamos cinco muestras que tienen 0, 0.1, 0.4, 4 y 10 mg / mL de proteína, respectivamente. Los tubos de ensayo se veían así:
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Primero, configuramos el espectrofotómetro a 550 nanómetros (nm). Usamos 550 porque esta es la longitud de onda de color observada para una proteína completa. Entonces, en otras palabras, estamos midiendo qué parte de esta longitud de onda hay en cada muestra. Cuando los medimos en el espectrofotómetro obtuvimos estos resultados:
0 mg / mL = 0.04 abs
0,1 mg / ml = 0,08 abs
Ecuación de heredabilidad en sentido estricto y amplio y aplicaciones
0,4 mg / ml = 0,12 abs
4.0 mg / mL = 0.3 abs
10 mg / mL = 0,6 abs
Cuando graficamos estos datos, poniendo las concentraciones conocidas de proteína en el eje x y la absorbancia en el eje y , podemos encontrar que la línea de la gráfica es: y = 0.0533 x + 0.0735. Hay varios programas que calcularán la línea del gráfico.
Entonces, y se refiere a la absorbancia yx se refiere a la concentración de proteína. Ahora, siguiendo los pasos que acabamos de cubrir, podemos usar la absorbancia encontrada en cada muestra y traducir esto en la concentración de proteína. Digamos que tenemos una absorbancia de 0,22 para nuestra muestra. Conectamos esto y podemos determinar la concentración de proteína:
¿Qué es la Ecuación de Estado de los Gases Reales?
0,22 = 0,0533 x + 0,0735
0,22 – 0,0735 = 0,0533 x
0,1465 = 0,0533 x
0,1465 / 0,0533 = x
2,7486 = x
La concentración de proteína es de 2,7 mg / ml.
Entonces, la próxima vez que estés en el supermercado y estés viendo la información nutricional de una caja de cereal o una bolsa de papas fritas y te preguntes cómo sabían cuántos gramos de proteína por porción había en la comida, ¡Sepa cómo funciona el proceso!
Resumen de la lección
La prueba de biuret analiza los enlaces peptídicos en las proteínas. El cobre II del reactivo forma un complejo con los enlaces peptídicos en condiciones alcalinas. Cuando se forma este complejo, la muestra cambia de un color azul claro a un color violeta, con una baja concentración de proteína pasando a azul claro y una alta concentración de proteína pasando a violeta. De acuerdo con la ley de Beer , la absorción se puede medir y es directamente proporcional a la proteína en la muestra.
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