Cómo conservar, teñir y montar muestras de microscopio

¿Por qué utilizar diapositivas?

La observación de sujetos microscópicos, tanto vivos como no vivos, es una tarea fascinante e iluminadora. Quizás recuerde la primera vez que usó una lupa o un microscopio para ver más de cerca su huella digital, una hormiga, una célula vegetal o cualquier otra observación cercana. Estas muestras se colocan en rectángulos de vidrio delgados llamados portaobjetos y se cubren con un pequeño cubreobjetos para su observación. A veces, la muestra del portaobjetos es un organismo completo. Otras veces es un delgado corte de tejido o un frotis de líquido en el que se observan células. Hay tres tipos básicos de portaobjetos que se pueden observar bien con un microscopio óptico, ¡que ahora aprenderemos a preparar!

Toboganes de montaje en seco o en húmedo

Las diapositivas más fáciles de preparar son las de montaje en seco . Se trata esencialmente de una muestra seca colocada directamente sobre el portaobjetos con el cubreobjetos encima. ¡Simple de hacer! Funcionan bien para muestras como pelo, polen, alas de insectos o piel seca. La principal desventaja de estos portaobjetos es que son muy temporales y se deshacen fácilmente sin líquido que sujete la cubierta al portaobjetos. ¡Una brisa puede sacar la muestra del portaobjetos antes de aplicar la cubierta! Manéjelos con cuidado o prepárese para preparar una nueva diapositiva.

El simple hecho de agregar líquido o aceite a una muestra en un portaobjetos de montaje seco lo convierte en un portaobjetos de montaje húmedo. Este tipo de portaobjetos puede tener o no un cubreobjetos en la parte superior y también puede ser eficaz para observar especímenes vivos. El líquido podría ser agua o un tipo de aceite, y proporciona un medio eficaz para que los especímenes vivos se muevan dentro, y también agrega un efecto de aumento que mejora la observación. Estos portaobjetos se preparan agregando primero una o dos gotas de líquido al portaobjetos, luego agregando la muestra, seguida de otra o dos gotas de líquido. De esta forma, la muestra queda completamente sumergida en el líquido. Si se aplica un cubreobjetos, debe hacerlo muy lentamente para evitar que las burbujas de aire queden atrapadas debajo. Agregar una cubierta también tendrá un ligero efecto de aplanamiento en la muestra, pero también evitará que se seque tan rápido.

Diapositivas de montaje preparadas

Las diapositivas más difíciles de hacer son las diapositivas de montaje preparadas . Estos son portaobjetos permanentes, generalmente con un tinte aplicado para resaltar partes específicas de la muestra. Se usa mejor en frotis de sangre, células bacterianas o muestras de tejido. A diferencia de un portaobjetos de montaje en húmedo, no puede haber cantidades excesivas de agua y la muestra debe cortarse en rodajas muy finas. Esta es una de las partes más desafiantes de hacer un tobogán de montaje preparado. Una vez que la muestra esté bien colocada y seca, con un tinte aplicado si es necesario, un fijadorse aplica para matar y preservar rápidamente la muestra y congelar su posición. Se pueden utilizar diferentes tipos de productos químicos como fijadores, los más fáciles de los cuales son una mezcla de alcohol y ácido acético, cuya combinación desnaturaliza las proteínas de la muestra. El fijador generalmente necesita alrededor de un día completo para asentarse, después de lo cual la muestra debe lavarse con agua, eliminando el fijador adicional. En este punto, la muestra está lista para conservarse en un gel de glicerina o en un medio de montaje hipoxi. Solo se debe agregar lo suficiente para cubrir la muestra antes de colocar el cubreobjetos en la parte superior. Una vez seco, el portaobjetos está terminado y es permanente.

Manchas

Para muestras unicelulares, digamos frotis de sangre o células bacterianas, generalmente se usa una tinción para resaltar y diferenciar las estructuras celulares. Esto se puede utilizar en portaobjetos temporales o permanentes. Si se aplica un tinte, la muestra debe secarse tanto como sea posible en el portaobjetos. Existen varios tipos diferentes de tintes que se pueden aplicar para teñir la muestra, que varían según el tipo de estructuras a resaltar. Por ejemplo, la fuschin es un tinte que se adhiere al colágeno, las mitocondrias y las fibras musculares lisas, y el azul de Nilo se usa para teñir los núcleos de las células, incluso en las células vivas.

Los tintes generalmente se aplican después de que las células hayan sido tratadas con una técnica de permeabilización en la que se aplica un surfactante para debilitar las paredes celulares, permitiendo que las moléculas de tinte penetren en las células de manera más efectiva. Muchas veces, las manchas de bacterias se fijan con calor.al portaobjetos antes de la tinción como una forma de fijar las células muertas al portaobjetos; esto generalmente se hace encendiendo una llama en la parte inferior del portaobjetos con la muestra en la parte superior. Luego, se vierte la mancha sobre la muestra, sumergiéndola por completo, a menudo antes de dejarla reposar durante un período de tiempo. Se agrega una solución de mordiente para ayudar a fijar la mancha en las células o tejidos, y se lava el exceso de mancha. Se recomienda ver la muestra recién teñida bajo el microscopio antes de agregar un cubreobjetos o montarlo permanentemente para asegurarse de que la mancha funcionó bien. Las manchas son una excelente manera de hacer que las características de las células y los tejidos que de otro modo serían indistinguibles se destaquen y se vuelvan más visibles, y se puede usar más de una mancha a la vez.

Preparación de muestras

Para un estudio eficaz de las muestras, es importante que los portaobjetos se manipulen con cuidado. Algunas sugerencias importantes para la preparación de diapositivas:

• Siempre tome un tobogán y cúbralo por los lados, preferiblemente con guantes. ¡Esto evitará que una huella dactilar grande obstruya su visión de la muestra más adelante!
• Manipule la muestra con fórceps. El uso de los dedos podría dañarlo y contaminarlo.
• Si la muestra requiere tinción, asegúrese de usar guantes y ropa protectora.

Resumen de la lección

Las muestras colocadas bajo un microscopio se ven mejor en portaobjetos, de los cuales hay tres tipos principales:

1. Los portaobjetos de montaje en seco son los más fáciles de preparar, simplemente agregando una muestra seca a un portaobjetos y cubriéndolo con un cubreobjetos.
2. Los portaobjetos de montaje en húmedo también son simples y fáciles de usar, ya que agregan líquido a la muestra para magnificarla y permitir el movimiento si es una muestra viva.
3. Los portaobjetos de montaje preparados son más complicados, ya que implican el uso de un fijador para matar y colocar la muestra para su fijación permanente en el portaobjetos, seguido de un medio de montaje para preservar la muestra y adherir el cubreobjetos al portaobjetos.

Los tintes se pueden utilizar para acentuar diferentes partes de la célula, y los tipos de tintes difieren en las partes que resaltan. Las manchas reaccionan con un mordiente, que ayuda a que la mancha penetre en la muestra. La preparación de portaobjetos es una forma necesaria de ver organismos de manera efectiva bajo un microscopio, ya sean temporales o permanentes.

Rodrigo Ricardo Editor y fundador