Variaciones de la PCR: ensayos, transcriptasa inversa y específicos de alelos

Reacción en cadena de la polimerasa

Es su primer día de trabajo en un laboratorio de biología molecular. Le presentan a su compañero asistente de laboratorio, Andrea. Ella te dice que tienes mucho que aprender, pero una de las primeras cosas que quiere repasar contigo es una técnica que se usa casi semanalmente en el laboratorio. Andrea le dice que necesita saber acerca de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , una técnica que se usa para producir grandes cantidades de un fragmento específico de ADN. Le dices que recuerdas haber aprendido todo sobre PCR en la escuela. La técnica es un proceso de tres pasos para desnaturalizar el ADN de doble hebra, hibridar cebadores y extender las hebras de ADN. Andrea dice que es genial que recuerdes los conceptos básicos de la PCR. También le dice que hacen diferentes tipos de PCR en este laboratorio. Le pides que los repase para que tú también los conozcas.

Ensayo

Andrea comienza explicando el ensayo de PCR , que es cuando se realiza una PCR para detectar mutaciones, afecciones y / o enfermedades. En este caso, la PCR se realiza siguiendo los mismos tres pasos básicos, pero al final, el ADN de control que es normal se compara con el ADN de la muestra para detectar cualquier mutación o cambio en ese ADN que pueda conducir a la condición o enfermedad que está presente. sospechado. Entonces, en el ensayo de PCR, el único cambio con respecto a la PCR típica se produce al final del proceso de PCR.

RT-PCR

Andrea le dice que el siguiente tipo de PCR es RT-PCR, que es la abreviatura de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa . Este es el proceso de PCR en el que el ARNm se convierte primero en ADNc mediante transcripción inversa, y luego el ADNc de doble hebra se copia utilizando el proceso de PCR habitual. Ella le dice que esto es útil en el laboratorio cuando están estudiando el ADN de eucariotas porque es más específico y no duplica las regiones no codificantes del ADN.

PCR específica de alelos

El último tipo de PCR que Andrea cubre con usted es la PCR específica de alelos . Ella explica que esta PCR se usa para detectar variaciones en una ubicación específica en un gen. Estas variaciones se denominan variaciones de un solo nucleótido . Hay genes que contienen lo que se conoce como polimorfismos de un solo nucleótido , que son secuencias de genes donde hay diferentes nucleótidos que aparecen en una ubicación específica del gen. Los diferentes nucleótidos que pueden ocurrir en esa posición se denominan variaciones de un solo nucleótido. Supone a Andrea que este tipo de PCR puede ser más útil a la hora de detectar trastornos y enfermedades genéticas, y que ya debería conocer la secuencia de ADN esperada para cada alelo antes de que este tipo de PCR sea útil. Andrea confirma su suposición y le dice que se ha utilizado durante años para detectar afecciones como la anemia de células falciformes y en asesoramiento genético para ayudar a los padres a comprender los riesgos de tener un hijo con un trastorno genético.

Similitudes y diferencias

Ahora, Andrea decide ponerte a prueba para ver qué tan bien absorbiste todo. Quiere que le cuente las similitudes y diferencias entre los tres tipos de PCR. Reconoce de inmediato que, técnicamente, todos ellos son variaciones de un ensayo de PCR, ya que todos se utilizan para detectar diferencias en las secuencias de ADN y todos siguen utilizando el mismo proceso de tres pasos para la PCR. Las diferencias que observa son que la RT-PCR comienza con ARNm y requiere el primer paso adicional de convertir el ARNm en ADNc, debe conocer las diferentes secuencias de alelos para la PCR específica de alelos y la RT-PCR amplifica solo el ADN codificante mientras que los otros dos amplificar toda la secuencia de ADN.

Resumen de la lección

Recapitulemos lo que aprendimos en esta lección. La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica de laboratorio que produce grandes cantidades de una pieza específica de ADN a través de un proceso de tres pasos para desnaturalizar el ADN bicatenario, hibridar cebadores y extender las cadenas de ADN. Los tres tipos de PCR cubiertos en esta lección incluyen:

• Ensayo de PCR : PCR donde el ADN de control se compara con la muestra de ADN.
• Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa : el ARNm se convierte en ADNc mediante transcripción inversa y luego se copia el ADNc bicatenario.
• PCR específica de alelos : PCR para detectar variaciones de un solo nucleótido , que son variaciones en la posición de un nucleótido que crean diferentes alelos.

Las similitudes incluyen:

• Todos ellos son variaciones de un ensayo de PCR.
• Todos siguen utilizando el mismo proceso de tres pasos para la PCR.

Las diferencias incluyen:

• La RT-PCR comienza con ARNm y requiere el primer paso adicional de convertir el ARNm en ADNc.
• La PCR específica de alelos requiere el conocimiento de las diferentes secuencias de alelos.
• La RT-PCR amplifica solo el ADN codificante, mientras que los otros dos amplifican la secuencia de ADN completa.

Rodrigo Ricardo Editor y fundador