Enumeración bacteriana: definición, métodos y ejemplo

Enumeración bacteriana

Cuando tenga una fiesta, es importante asegurarse de tener suficientes sillas y tazas para todos sus invitados. Enumerar, una palabra elegante para contar, estos elementos es simple. Son lo suficientemente grandes como para verlas a simple vista. Sin embargo, a veces las cosas no se ven tan fácilmente. Las bacterias son organismos microscópicos unicelulares que no se pueden ver sin un microscopio de alta potencia. Sin embargo, las bacterias son increíblemente importantes para la salud humana. Algunas bacterias viven en armonía con nuestro cuerpo, ayudándonos a realizar procesos biológicos como la digestión. Otras bacterias son patógenas y causan enfermedades en los seres humanos. De cualquier manera, es importante realizar un seguimiento de quién hay en nuestro entorno y en qué cantidades. Por ejemplo, los científicos necesitan saber cuántas bacterias están presentes en ciertos alimentos y bebidas para determinar si son higiénicas o no. Una forma de hacerlo es mediante la enumeración de bacterias o, bueno, contando las bacterias. Sin embargo, dado que las bacterias son tan pequeñas, no podemos simplemente mirar a nuestro alrededor para hacer el recuento. Los científicos usan una variedad de métodos para hacer esto, de los que aprenderemos aquí.

Recuento de células viables frente a totales

Antes de sumergirnos en los métodos, es importante verificar dos tipos de enumeraciones que los científicos podrían usar. Primero, a veces los científicos solo quieren saber sobre el recuento de células viables . Este es el número de células que están vivas en el momento del recuento. Estas células pueden crecer, dividirse y realizar sus funciones. Sin embargo, otras veces los científicos quieren utilizar un recuento total de células , que cuenta todas las células de una muestra, ya sean vivas o muertas. Los diferentes métodos utilizan recuentos de células viables frente a totales, y veremos las ventajas de cada uno.

Métodos

Bien, ahora que todo eso está fuera del camino, echemos un vistazo más de cerca a los diferentes métodos de enumeración que utilizan los científicos, uno a la vez.

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1. Recuento de placas estándar

Las bacterias son microscópicas, por lo que puede ser difícil contarlas simplemente mirando una muestra. Sin embargo, afortunadamente, las bacterias forman colonias cuando se cultivan en medio de agar sólido. Estas colonias son colecciones de células bacterianas clonadas, todas originadas en una sola célula. El recuento de placas estándar se aprovecha de esta situación. En el recuento en placa estándar, se diluye una muestra de bacterias y luego se siembra en medio de agar. Las placas se incuban y luego se forman colonias. Las colonias se pueden contar a simple vista y luego se puede calcular el número total de bacterias presentes en la muestra a partir del factor de dilución. Dado que este recuento solo tiene en cuenta las bacterias capaces de la división celular, produce un recuento de células viables.

2. Medidas turbidimétricas

Sin embargo, el recuento en placa estándar puede llevar algún tiempo, ya que las bacterias necesitan crecer para formar colonias. Una forma más rápida de enumerar las bacterias es utilizar medidas turbidimétricas . Este método de enumeración mide la cantidad de luz que puede atravesar una suspensión de bacterias. Cuantas más bacterias, menos luz pasará. La cantidad de luz que pasa se mide con un espectrofotómetro. Dado que este método solo mide la cantidad de luz que pasa a través de la muestra, produce un recuento total de células, en lugar de un recuento de células viables. Sin embargo, el espectrofotómetro solo mide la cantidad de luz que atraviesa la muestra. ¿Cómo correlacionamos eso con la cantidad de bacterias presentes? Antes de medir una muestra desconocida, se deben utilizar controles conocidos para crear una curva estándar. Utilizando recuentos directos o un recuento en placa estándar, se utilizan muestras con un número conocido de bacterias en el espectrofotómetro y se crea una curva estándar. Luego, la cantidad de luz que pasa a través de muestras desconocidas se puede ajustar en la curva estándar y enumerar las bacterias.

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3. Recuentos microscópicos directos

Aunque las bacterias no se pueden contar visualmente a simple vista, puede verlas con un microscopio. Los recuentos microscópicos directos son excelentes para observar el recuento total de células. Esto se debe a que implica utilizar un volumen conocido de líquido y, por tanto, poder contar el número total de bacterias en 10-20 campos microscópicos. Usando el número promedio de celdas por campo, el número total de celdas se puede calcular usando el volumen total de la muestra. Aunque este método permite a los científicos contar directamente las células presentes en una muestra, puede llevar mucho tiempo.

4. Determinación de la masa celular

Cada célula bacteriana tiene una masa específica. Al tomar la masa de una muestra completa, se puede calcular el número de bacterias. El primer paso es separar las células del medio por filtración. Luego, las bacterias se secan en un desecador. Luego, la masa se puede usar para calcular el número total de bacterias en la muestra. Sin embargo, este método es propenso a errores. Puede ser difícil secar completamente la muestra, ya que la humedad atmosférica puede filtrarse en la muestra, aumentando artificialmente el peso. Además, cualquier material particulado que no se haya filtrado también se desecará y se contará en el peso bacteriano. Este método también cuenta todas las células y, por lo tanto, es un procedimiento para el recuento total de células.

5. Medición de la actividad celular

Todas las células vivas pasan por muchos procesos bioquímicos durante el metabolismo. Descomponen los azúcares, crean energía y luego gastan esa energía para crecer, reproducirse y realizar funciones celulares. Una forma de estimar cuántas bacterias hay en una muestra es medir algunas de estas actividades celulares. Por ejemplo, las bacterias producen dióxido de carbono mientras atraviesan ciertos pasos del metabolismo. Al medir la cantidad de dióxido de carbono producido, los científicos pueden estimar cuántas bacterias hay en una muestra. También se pueden utilizar como medida ácidos, ATP u otros productos celulares. De manera similar, la cantidad de nutrientes u oxígeno que usa una muestra particular también se puede usar para evaluar la enumeración de células viables. Sin embargo, estos métodos pueden ser costosos y requieren un estándar para correlacionar el uso o la producción de estas moléculas con el número de células presentes.

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Resumen de la lección

Dediquemos un par de minutos a revisar la información importante que hemos aprendido. Específicamente, los conceptos clave y los tipos de enumeración bacteriana que cubrimos. La enumeración de bacterias implica el recuento de células bacterianas. El recuento de células viables cuenta las células vivas y el recuento total de células cuenta todas las células de una muestra. El recuento en placa estándar implica diluir cultivos en placas de agar y contar el número de colonias. Las mediciones turbidimétricas miden la cantidad de luz que puede pasar a través de un cultivo celular líquido para determinar cuántas bacterias están presentes en un recuento celular total. Recuentos microscópicos directoscuente el número de bacterias presentes en un campo microscópico directamente para calcular el número total presente en una muestra. La masa celular total en una muestra se puede usar para calcular cuántas bacterias están presentes en función del peso promedio por célula bacteriana, aunque este mensaje es propenso a errores y no es ideal. Por último, se pueden medir actividades celulares como los procesos metabólicos para estimar el número total de bacterias en una muestra. De hecho, existen varias formas de medir la cantidad de bacterias en el laboratorio. Sin embargo, esto es algo bueno, ya que puede hacer que el trabajo de un científico que estudie las bacterias sea mucho más interesante y divertido.

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Rodrigo Ricardo Editor y fundador

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