Inmunocitoquímica e Inmunofluorescencia

¿Qué es la tinción celular?

Hay un viejo refrán que dice que una imagen vale más que mil palabras. Cuando pensamos en esta frase, podríamos estar imaginando nuestras propias experiencias o quizás imaginando cómo las imágenes ayudan a contar una historia. Pero las imágenes no solo son útiles para la historia o la literatura, también ayudan a contar una historia en la ciencia.

Aunque podríamos pensar en los datos científicos como números y gráficos, las imágenes también son bastante valiosas. Las imágenes científicas pueden revelar cambios internos o cambios en el comportamiento celular que ocurren durante la enfermedad. Esto puede ayudar a los investigadores a desarrollar tratamientos para enfermedades y comprender mejor los procesos celulares.

Sin embargo, las células son microscópicas y, por lo tanto, se deben seguir procedimientos especiales al mirar imágenes de células. Una técnica es la tinción celular , en la que se iluminan diferentes partes de las células utilizando varios tintes o productos químicos para revelar las estructuras celulares. La tinción celular viene en muchos sabores diferentes dependiendo de lo que los investigadores estén tratando de obtener y las células que estén usando.

Hoy vamos a hablar de dos métodos de tinción celular, inmunocitoquímica e inmunofluorescencia. Las principales diferencias entre estos tipos dependen del tipo de muestra y del método de tinción utilizado.

Inmunocitoquímica

El prefijo ‘cito-‘ significa célula, por lo que todos los métodos de inmunocitoquímica se centran en obtener imágenes de muestras de células individuales. Esto contrasta con otras técnicas que analizan secciones de tejido por imágenes. Para realizar la inmunocitoquímica, las células individuales primero deben aislarse y colocarse en portaobjetos de vidrio para obtener imágenes. Por lo general, estas células se cultivan en un laboratorio para su estudio.

El prefijo ‘inmuno-‘ se refiere a la participación de anticuerpos en esta técnica de tinción. Los anticuerpos son proteínas específicas de otra molécula. En nuestros cuerpos, nuestras células inmunes producen anticuerpos que son específicos para un patógeno en particular. Los anticuerpos coinciden con el patógeno y se unen a él, lo que permite que el sistema inmunológico cure más fácilmente la infección.

Los investigadores pueden crear anticuerpos contra proteínas de interés para ayudar a localizar las proteínas en la célula. Los investigadores aplican anticuerpos primarios que se unen a la proteína de interés y luego los detectan mediante anticuerpos secundarios. Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios y tienen algún tipo de etiqueta para su detección.

Esto nos lleva a la última parte de la inmunocitoquímica, que es la parte de “química”. Esta parte de la palabra se refiere a la química involucrada en la detección de la proteína. Tradicionalmente, la inmunocitoquímica utiliza métodos de detección cromogénicos .

En el método cromogénico, se une una enzima al anticuerpo secundario. Una enzima de uso común es la peroxidasa de rábano picante. Luego, se agrega el sustrato y se produce un cambio de color donde la enzima está presente, revelando la ubicación de la proteína objetivo. Para la peroxidasa de rábano picante, se usa peróxido y aparece como un precipitado marrón.

La detección cromogénica es útil porque se puede ver fácilmente con un microscopio óptico sin equipo especial. Las muestras también duran muchos años en almacenamiento y el color no se desvanece fácilmente. Los métodos cromogénicos son algunos de los métodos más antiguos de tinción celular.

Inmunofluorescencia

La inmunofluorescencia es otra técnica de tinción que utiliza fluoróforos en lugar de métodos cromogénicos para la detección. Como podemos ver, la palabra ‘inmunofluorescencia’ contiene el prefijo ‘inmuno-‘, por lo que este método también utiliza anticuerpos. De manera similar, existe un anticuerpo primario que se une a la proteína de interés. El anticuerpo primario es detectado por un anticuerpo secundario. El anticuerpo secundario está marcado con un fluoróforo o una molécula fluorescente. Bajo la longitud de onda de luz correcta, el fluoróforo emite luz por sí mismo que puede detectarse con un microscopio especial. La muestra se ilumina donde está presente la proteína de interés.

La inmunofluorescencia se puede usar con inmunocitoquímica en lugar de métodos cromogénicos, o se puede usar para teñir secciones de tejido completas. Cualquier método de tinción que utilice anticuerpos marcados con fluoróforos se considera inmunofluorescencia.

Este método tiene unos grandes beneficios que han incrementado su uso sobre el de los métodos cromogénicos en los últimos años. Primero, los investigadores pueden etiquetar y localizar múltiples proteínas a la vez, ya que se pueden usar muchos colores diferentes de fluoróforos. Una proteína puede ser verde, mientras que otra puede aparecer roja y aún así el ADN puede estar marcado con un fluoróforo azul. Esto les da a los investigadores una imagen más completa de lo que está sucediendo en una célula o tejido en particular.

Sin embargo, para tomar fotografías de células inmunofluorescentes, los investigadores deben usar un microscopio especial que tenga la capacidad de excitar los fluoróforos. Además, las muestras deben almacenarse en la oscuridad ya que los fluoróforos pueden fotoblanquearse, donde el fluoróforo queda expuesto a la luz y ya no puede emitir fluorescencia. Esto también puede suceder con el tiempo, por lo que los portaobjetos inmunofluorescentes no se pueden utilizar a largo plazo.

Resumen de la lección

Las técnicas de tinción celular implican imágenes de células utilizando tintes o productos químicos de diferentes colores para revelar su estructura. La tinción celular se puede utilizar para revelar los cambios que ocurren durante la enfermedad. La inmunocitoquímica es un tipo de tinción celular que utiliza anticuerpos equipados con etiquetas cromogénicas o fluorescentes para obtener imágenes de células individuales. La inmunohistoquímica utiliza tradicionalmente métodos cromogénicos de detección en los que las enzimas cambian un sustrato a un precipitado coloreado que se puede ver bajo el microscopio. Sin embargo, la inmunofluorescencia , en la que los anticuerpos se unen a los fluoróforos para detectar proteínas en una muestra, también se ha utilizado con más frecuencia en inmunocitoquímica.