Ensayo de proteínas de Bradford: ventajas y desventajas
Descripción general del ensayo de proteínas de Bradford
¿Cuánta proteína había en tu cena anoche? ¿Cómo se determina la proteína que figura en las etiquetas de información nutricional? Se utilizan varios métodos diferentes, pero uno de los más rápidos es el ensayo de proteínas de Bradford.
El ensayo de proteínas de Bradford utiliza un tinte azul que se une a aminoácidos específicos y la intensidad resultante del color azul se puede medir con un espectrofotómetro. La absorbancia resultante se compara con un estándar para determinar la concentración de proteína en la muestra.
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Este método también se llama ensayo de proteína de colorante Coomassie, debido al hecho de que el colorante utilizado se llama colorante Coomassie. El nombre “ensayo de proteínas de Bradford” proviene de la primera persona que lo desarrolló, Marion M. Bradford. Este método es bastante nuevo, ya que se desarrolló en los últimos 50 años.
Ventajas del ensayo de proteínas de Bradford
La mayor ventaja del ensayo de proteínas de Bradford es su velocidad. Todo el proceso solo toma alrededor de media hora. Una vez que se ha configurado la prueba y se ha medido el estándar, cada muestra solo toma un par de minutos para probar. Esto permite que se analicen varias muestras en un corto período de tiempo y que se pueda volver a analizar una muestra rápidamente.
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Otra ventaja de esta prueba es que utiliza luz visible (en lugar de luz ultravioleta) para medir la absorbancia de la muestra. Muchas otras muestras utilizan una longitud de onda no superior a 280 nm, que se encuentra en el espectro UV. Dado que esta prueba utiliza 595 nm (que se encuentra en el espectro de luz visible), los laboratorios no necesitan un espectrofotómetro UV y pueden confiar simplemente en un espectrofotómetro de luz visible.
El ensayo de proteínas de Bradford también puede detectar una gran variedad de proteínas, detectando cantidades tan pequeñas como 1 microgramo en una muestra.
Desventajas del ensayo de proteínas de Bradford
La mayor desventaja del ensayo de proteínas de Bradford es que no funciona si hay detergentes o tensioactivos en la muestra o si la muestra es básica. En particular, los tensioactivos que se utilizan a menudo para solubilizar algunos tipos de proteínas interferirán con la prueba, provocando la precipitación del tinte.
Por lo tanto, con muestras que requieren este tipo de solución, el ensayo de proteínas de Bradford no será una buena opción. Si la muestra es muy básica, digamos arriba de 9, entonces simplemente necesita diluirse más para llevarla a un pH en el que la prueba funcione.
Otra desventaja es que solo identifica los aminoácidos arginina, lisina e histidina. Si la proteína que se está probando tiene una concentración particularmente alta o baja de estos aminoácidos, los resultados estarán sesgados.
Además, el ensayo de proteínas de Bradford no se puede utilizar en proteínas de bajo peso molecular. La proteína debe tener al menos 3000 daltons (aproximadamente 25 aminoácidos de longitud) para que este ensayo funcione.
Resumen de la lección
El ensayo de proteínas de Bradford es una prueba desarrollada recientemente para determinar la concentración de proteína total de una muestra. Hay varias ventajas de este ensayo que incluyen:
- Es rapido
- Utiliza luz visible, no UV
- Puede detectar concentraciones muy pequeñas.
También hay varias desventajas de este ensayo que incluyen:
- Los tensioactivos interfieren con la prueba
- No funciona a pH alto
- Solo identifica los aminoácidos específicos arginina, lisina e hisidina.
- No se puede utilizar en proteínas de bajo peso molecular.