Tinciones simples y diferenciales: definición y ejemplos

Un microscopio para Navidad

¡Por fin es la mañana de Navidad! Este año sabes que obtendrás lo que pediste. No te volviste ridículo y pediste un pony para compartir tu apartamento en la ciudad de Nueva York. No te volviste tecno superficial y pediste un nuevo teléfono inteligente 12, ahora completo con un pequeño microondas para bombardear rollos de pizza mientras envías mensajes de texto. Este año, solicitó un microscopio óptico compuesto, uno bueno, con aumento de 1000X, inmersión en aceite y una cámara digital. Las bacterias están en todas partes y, con suerte, ¡finalmente puedes verlas!

¡Éxito! Ahora eres el orgulloso propietario de un nuevo y brillante microscopio. Olvidándose del resto de sus regalos, frota la suela de sus zapatos para correr de 2 años, pasa la suciedad por un nuevo portaobjetos de vidrio y rápidamente comienza a buscar microbios. Pero no puedes encontrar nada. Debe haber bacterias en tus zapatos. Después de todo, las bacterias están en todas partes, en todas partes excepto en los zapatos, aparentemente.

Manchas

En realidad, es probable que su diapositiva esté repleta de bacterias. En colonias compuestas por millones de células, las bacterias pueden tener una amplia gama de colores y texturas. Pero la gran mayoría de las células bacterianas individuales son casi completamente incoloras. La pared celular y el citoplasma de una bacteria individual simplemente no serán lo suficientemente visibles para que usted los vea, incluso con su costoso microscopio óptico. Lo que necesita es algo para mejorar la visibilidad de esa bacteria. Lo que necesitas es una mancha.

Una mancha es un compuesto químico que se utiliza para mejorar la visibilidad de un objeto u organismo microscópico. Pero no todas las manchas son iguales. El tipo de mancha y la técnica que utilice dependen de lo que esté mirando, la estructura que esté buscando y lo que desee que logre el procedimiento de tinción. Echemos un vistazo rápido a algunas de las categorías más comunes de técnicas de tinción.

Técnica de tinción simple

En una técnica de tinción simple , un tinte catiónico básico se inunda a través de una muestra, agregando color a las células. Antes de continuar, definamos la palabra catiónica. Un catión es simplemente un ión cargado positivamente. Las moléculas que componen los tintes básicos tienen carga positiva. Esto es importante porque la pared celular y el citoplasma de las células bacterianas tienen carga negativa. El tinte cargado positivamente es atraído por las células cargadas negativamente, lo que mejora la capacidad del tinte para adherirse y colorear las células. Ahora, esas celdas casi incoloras deberían aparecer en la diapositiva en cualquier número de colores.

Es importante tener en cuenta que antes de que una muestra pueda teñirse con un simple tinte, debe fijarse con calor al portaobjetos. Durante la fijación por calor, se agita un portaobjetos de vidrio sobre una llama abierta. Esto mata las bacterias, une las células al portaobjetos y mejora la absorción de la tinción. Este proceso hace que la tinción sea más efectiva, pero puede dañar o distorsionar las células, cambiando su apariencia de un estado verdaderamente natural y de vida libre.

El azul de metileno es un ejemplo clásico de una simple mancha. Esta mancha azul coloreará todas las células de azul, haciéndolas destacar sobre el fondo brillante del microscopio óptico. Observe a continuación cómo el fondo permanece generalmente claro, mientras que las células bacterianas son de un azul profundo.

El azul de metileno tiñe todas las células de azul.

Técnica de tinción negativa

En una técnica de tinción negativa , se mezcla un tinte aniónico ácido con una muestra de células. El tinte cambia el color del fondo, no las células, lo que hace que las células se destaquen. Este proceso puede considerarse lo contrario de la tinción simple. Un anión es un ion con carga negativa, por lo tanto, un tinte aniónico tiene una carga negativa. Cuando el tinte cargado negativamente se agrega a las células cargadas negativamente, las dos se repelen, lo que significa que se separan. Cuando la mezcla se coloca en un portaobjetos y se seca al aire, el resultado es un fondo teñido de oscuro que rodea a las células claras y sin teñir. Las células transparentes ahora son muy visibles, pero no se ven afectadas por el contacto directo con el tinte y la distorsión de la fijación por calor, que no es necesaria en una tinción negativa.

La tinta china es el ejemplo clásico de tinción negativa. Cambiará el fondo de un marrón oscuro a negro, dejando las células claras y brillantes sin teñir y muy visibles. A continuación se muestran las células del patógeno fúngico Cryptococcus. La tinta china ha coloreado el fondo de marrón, dejando a las células su color natural.

La tinta china convierte el fondo de un color marrón oscuro a negro.

Técnica de tinción diferencial

Las tinciones simples y las tinciones negativas son excelentes para observar las células, pero teñirán casi todas las células por igual. ¿Qué sucede si tiene una muestra mixta, lo que significa que hay más de un tipo de bacteria presente o sospecha que su cultivo puro está contaminado? Sería bueno si pudiera teñir algunas células, pero no otras, o si diferentes tipos de bacterias se verían diferentes.

Ingrese a la técnica de tinción diferencial , un procedimiento que permite al observador distinguir visualmente entre diferentes tipos de células bacterianas basándose en la idea de que no todos los tipos de células se tiñen por igual. Esta técnica aprovecha las diferentes propiedades físicas que han desarrollado distintas bacterias. La mejor manera de entender este concepto es observar la técnica de tinción diferencial más famosa, la tinción de Gram.

La tinción de Gram es una técnica de tinción diferencial que puede detectar dos tipos diferentes de bacterias según las diferencias en la estructura de la pared celular. Hay dos tipos principales de paredes celulares, que llevan el nombre de cómo aparecen después de la tinción de Gram. Las paredes de las células grampositivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano, un compuesto en forma de malla que agrega fuerza y ​​rigidez a la pared celular. Las paredes de las células gramnegativas tienen una capa delgada de peptidoglicano que está cubierta por una membrana externa.

Durante una tinción de Gram, la tinción primaria, cristal violeta, convierte todas las células en moradas, pero puede eliminarse fácilmente de la fina capa de peptidoglicano de las paredes de las células Gram negativas, dejándolas transparentes. La capa gruesa de peptidoglicano atrapa el cristal violeta en las células Gram positivas, evitando que se elimine por lavado.

La adición de una segunda tinción, safranina, teñirá las células Gram negativas transparentes de un color rojo. Las células grampositivas permanecerán violetas. Puede ver a continuación cómo esto distinguirá las células grampositivas de las células gramnegativas en función de las diferentes formas en que las paredes celulares absorben la tinción. Las bacterias con paredes celulares compuestas por una capa gruesa de peptidoglicano se vuelven moradas o son Gram positivas. Las bacterias con paredes celulares compuestas por una fina capa de peptidoglicano y una membrana externa se vuelven rojas o son gramnegativas.

Las bacterias teñidas de púrpura son Gram-positivas, mientras que las bacterias teñidas de rojo son Gram-negativas.

Resumen de la lección

Revisemos.

Las células bacterianas individuales son casi incoloras, lo que dificulta su visualización con el microscopio óptico. Para superar este problema, las bacterias se tiñen para mejorar la visibilidad. Existen muchas técnicas de tinción diferentes.

En una técnica de tinción simple , una tinción con carga positiva colorea las células cargadas negativamente, haciéndolas destacar sobre el fondo claro. El azul de metileno es una mancha simple que colorea las células de azul.

En una técnica de tinción negativa , una tinción cargada negativamente colorea el fondo, dejando las células de color claro y sin teñir. Las células brillantes son fácilmente visibles contra el fondo oscuro. La tinta china es una mancha negativa que colorea el fondo de color marrón, dejando las células brillantes y visibles.

Una técnica de tinción diferencial es un procedimiento que permite al observador distinguir visualmente entre diferentes tipos de células bacterianas basándose en la idea de que no todos los tipos de células se tiñen por igual. Algunas características físicas conducen a una absorción desigual de una mancha, dependiendo de las bacterias específicas. La diferencia de color resultante se puede utilizar para distinguir diferentes tipos de células. La tinción de Gram es una técnica diferencial que colorea las células Gram-positivas con una pared celular espesa de peptidoglicano de color púrpura mientras que colorea las células Gram-negativas con una pared celular delgada de peptidoglicano de rojo.

Los resultados del aprendizaje

Cuando haya pasado por esta lección, podrá:

• Darse cuenta de por qué es necesario teñir las bacterias para verlas al microscopio
• Diferenciar entre técnicas de tinción simples y negativas e identificar el tinte común utilizado en cada
• Indicar cómo funcionan las técnicas de tinción diferencial
• Comprender qué se entiende por Gram-negativos y Gram-positivos

Rodrigo Ricardo Editor y fundador